新冠病毒的核酸检测法

新型冠状病毒的检测方法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测几种方法。由于抗原检测检出率较低，目前新冠检测主要集中在抗体和核酸检测。核酸检测目前是新冠病毒检测的“金标准”，具有早期诊断、灵敏度高和特异性高等特点；但抗体检测操作便捷、检测迅速，可作为核酸诊断的补充手段，但由于抗体检测“假阳性”和“假阴性”的局限性，不适合用于复工复产复学等普通人群筛查，也不适用于在低流地区的流行病学调查。

检测原理：

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。新型冠状病毒（2019-nCoV）属于Beta冠状病毒属，该病毒是蛋白包裹的单链正链RNA病毒，寄生和感染高等动物（包括人）。病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其他病原体的标志物，新型冠状病毒出现后，我国科学家已经成功发现了新型冠状病毒中的特异性核酸序列。如疑似患者样本中能检测到新型冠状病毒的特异性核酸序列，则认为该患者可能被新型冠状病毒特异性核酸序列的方法是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。由于新型冠状病毒是RNA病毒，试剂盒检测基本都采用反转录加实时聚合酶链式反应法（RT-PCR）,扩增病原体的核酸（RNA）,同时通过荧光探针实时检测扩增产物。在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条DNA；链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

由于每个RT-PCR反应需要2个小时左右才出结果，因此，试剂盒在开发时一般都针对病毒序列中高度保守的2~3各序列比如编码replicase（复制酶）或者necleocapsid（核蛋白衣，核鞘）的核酸序列设计引物，但是各个方法用的序列都不完全相同。一些方法使用multiplex，也就是把多个目标序列在同一反应管中扩增；另一些采用分步，先用一个目标序列筛查，阳性后再用另一个序列确认，这样可以有效缩短整个流程时间，加快检测速度。另外RNA病毒变异很快，用多个保守目标序列可以防止病毒变异造成的假阴性。

目前批准产品均基于新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b（open reading frame 1ab，ORF1ab）、包膜蛋白（Envelope  protein，E）和核衣壳蛋白（nucleocapsid protein，N）进行选择。不同产品的检测原理基本一致，但是其引物、探针设计存在不同，有单靶区段（ORF1ab）、双靶区段（ORF1ab、N蛋白）、三靶区段（ORF1ab、N蛋白和E蛋白）的检测和判读差别。一般检测位于病毒ORF1ab和N基因上的两个靶标，同一份标本需满足双靶标阳性或重复检测为单靶标阳性或两种标本同时满足单靶标才能确认SARS-CoV-2病毒核酸阳性。

检测流程：

检测程序需要经过五个步骤，取样、留样、保存、核酸提取、上机检测。首先根据试剂盒说明书进行样本采集，样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。由于RNA易降解，因此，采集样本时使用无RNA酶的拭子和无RNA酶的储存管。获得患者样本后，需尽快进行检测，如无法立即检测需要进行低温封装，并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。最后是荧光PCR核酸检测，也就是上机器检测，将提取物进行荧光PCR扩增反应，需要70—80分钟。

在核酸检测中灭活型病毒保存液具有什么优势？

年前，国家卫健委疾控局在国务院联防联控机制新闻发布会上表示，春节返乡人员要拿着7日以内的核酸阴性检测证明才能够返乡。同时返乡人员返回工作地上班时也要做核酸检测。

检测机构要在收到样本后的12小时内反馈检测结果；如果说一定要返乡，返乡人员需持有7日以内的核酸检测阴性证明才能够返乡，这势必会增加医护人员的检测压力，在核酸检测过程中安全性也会变得极为重要，我们通常选用灭活型的病毒保存液来保存核酸。不只是因为它不需要保留病毒活性，更在于它杀灭病毒的同时不会对后续的病毒核酸检测造成影响。

灭活病毒还有以下这些优势：

①、容易保存病毒，而且不容易被降解

灭活型病毒保存液可在常温保存病毒而且运输过程中病毒不容易被降解，按大多数商业化试剂盒进行提取后，获得DNA/RNA质量好，得率高，可完成各种基因检测及分析实验，如PCR、qPCR等。

②、可降低RNA被降解从而造成假阴性的概率

核酸样本保存条件苛刻，RNA极易裂解，4℃仅可存放24h，运输过程过长RNA就会出现提前被降解的现象，从而导致检测假阴性增多。灭活型病毒保存液是采样管内的一种病毒样本保护性运输介质，防止病毒采样后不能及时检测在送检过程中病毒降解，避免因病毒在检测途中提前降解造成假阴性。

③、可以减少核酸提取过程中的感染

灭活型病毒保存液是高效灭活病毒的，在采样与检测环节都比非灭活保存液安全性高，不会造成二次感染，所以操作要求和实验环境要求都稍微低一些。对于快速核酸检测的效率和核酸检测覆盖率来说更有优势。

④、适用于多种病毒检测

灭活型病毒保存液适用于新冠病毒、流感病毒、手足口病毒等常见的病毒样本采集保存运输工作，可采集咽拭子鼻拭子或特定部位组织样本，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床试验。

随着疫情的反复，核酸检测对于广大商家而言无疑是个大商机，而核酸检测的核心部分就是病毒保存液，所以病毒保存液在市面上的竞争也与日俱增。这就导致有的厂商为了趁热度捞钱，在产品质量上可能就有所偏差出入了，很多客户在选择产品时不了解产品的特性，先将就使用一下，结果就会出现很多不愿意看到的事故问题。那如何选择优质而不将就的病毒采样管厂家呢？且随我来看一看。

①、厂家能够解答使用方面的各种难题。

口碑好的病毒采样管厂家善于实施市场调研工作，能够通过大量资料和数据的收集，整合出令客户颇为烦恼的棘手难题，并作出细致分类。这样一来，在接待客户的过程中，能从只言片语中迅速抓取到有效信息，加以全方位解答，很多问题都是根据统计发现属于客户普遍会遇到的困扰。而优质的病毒保存液厂家能够为采购者提供合理的使用方案和解决问题的方案，帮助采购者获得更好的使用效果。

②、能够确保病毒保存液原料的优质

高度负责任的病毒采样管厂家不仅能够兑现许下的承诺，还能确保在不夸大的前提下描述事实，例如对于原材料的筛选严格到位，杜绝弄虚作假。而不负责任的厂家只会为了促单而大肆渲染，在此过程中，消费者应该擦亮双眼、明辨是非。

③、病毒保存液价格是否合理

采购任何产品，价格都是非常关键的一个因素，因为疫情原因导致很多企业的常规产品销售情况并不良好，所以市场上有很多企业为了生存会以次充好，低价售卖，这样的产品虽然价格低廉，但是品质没有保证，价格和价值往往是相对应的，如果病毒保存液的价格如果远远低于市场平均价，那么就要认真考虑一下其质量是否可靠。因此，采购者在选择病毒保存液厂家的时候要注意不能一味的追求低价格。

④、物流运输是否安全可靠

因为病毒保存液是液态的，如果包装不到位稍有颠簸就会发生渗漏，这样就会给客户带来非常大的损失，所以在包装材质的遴选、结构的设计、制造工艺等这些方面一定要把好关，发货前做到“百试不漏”，只有在细节方面做到位，客户才会源源不断。

新冠病毒的检测有必要用病毒保存液吗？

近日，我国出现新冠本土病例，除患者伴侣外，其家中门把手、开关、冰箱里的食物，菜板等环境及是食品样本中已完成检测的126份样本有11例呈阳性。这新冠病毒在除了人之外的物品及食物上如此顽强，那病毒样本的体外保存还有必要用病毒保存液吗？

首先，核酸检测中新冠病毒在样本采样后，如果不能及时检测需要运输或短时间内保存，是必须采用病毒保存液的。可能会有人觉得新冠病毒和其他的病毒不一样，在体外要顽强得多，没有必要用病毒保存液来保存病毒样本，但实际上并不是这样的。

的确，自疫情以来，新冠除了在人和少数动物身上检测出阳性外，在食物特别是冷链生鲜类食物上也检测出阳性，甚至在产品外包装、电梯、门把手、开关等频繁接触的物体上也检测出阳性，从这方面来看病毒确实很顽强，这也凸显了疫情防控工作的复杂性、严峻性和防控任务的艰巨性，敲响了疫情防控警钟。

不过需要注意的是，虽然物体上确实检测出了病毒，而且不完全统计的阳性比率还接近十分之一，说明病毒可以在物体表面部分保留一定时间。虽然说保留的病毒可能很少，保留时间可能也不长，但人长期频繁接触的话还是比较有感染风险的。

但是对于核酸检测来说就不一样了，检测需要的是结果完全准确的，如果采样管装的病毒样本没有添加保存液，没有及时检测在运输保存过程中极大概率实会出现病毒核酸降解的，别说十分之一哪怕它在采样管中的存活能达到99％都不行，就算1个也有可能造成降解导致假阴性。

病毒采样管中样本需要运输保存时不仅要添加病毒保存液，还要看不同的检测条件要求而选择灭活型还是非灭活型的保存液，同时也要提醒大家，在人体频繁接触的物体上大家务必也要做好防护措施。

表面活性剂在病毒保存液中的作用

疫情防控及时是全国人民艰苦努力的结果，也不离开科技的支持。提到战疫科技不得不提到阻隔疫情扩散的重要手段——核酸检测。而病毒保存液是核酸检测的核心关键。

新冠病毒核酸检测的原理就是通过细胞裂解液，让病毒的RNA裸露出来，然后用实时荧光RT-PCR进行检测。因为新冠病毒的传染性非常强，为保护检测人员，降低其感染的风险，需要对病毒进行灭活处理。

病毒灭活是使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，主要方法是水浴高温灭活，即将样本置于水浴箱经半个小时56℃的高温灭活。另外，有些核酸检测试剂盒自带病毒灭活保存液，在样本采集阶段就能够“杀死”病毒并保护RNA。

这种病毒灭活保存液由各种各样成分组成，下面主要介绍下表面活性剂在保存液中发挥着什么作用。

表面活性剂是指具有固定的亲水亲油基团，在溶液的表面能定向排列，并能使表面张力显著下降的物质。表面活性剂的基本性质有润湿和渗透性、乳化和破乳性、分散性、增融性、发泡和消泡性、洗涤性。派生性质有柔软性、抗静电性、杀菌性和防腐性。

表面活性剂在病毒灭活保存液中主要作用为改变液体表面张力，防止液体挂在管壁并且加强保存液液中各种成分的相容性；还有蛋白质核酸水中溶解效果不好，添加表面活性剂用来改变溶解性；最后表面活性剂机油杀菌性能，将其添加在保存液中防止细菌生长，保护样本提高检测准确度。

这种病毒保存液一方面直接裂解病毒释放核酸，消除核酸分解酶（RNase）以防止病毒的RNA降解。另一方面又能让病毒的蛋白变性，失去活性而“死掉”，不再有传染性，提高运输和检测阶段的安全性。

华晨阳科技是病毒保存液的专业生产商，提供灭活和非灭活两种不同的病毒保存液。

一次性病毒采样管主要用于测试样品的采集，运输和储存。病毒采样管主要由拭子和包含病毒保存液的采样管组成。在维护方面，存在维护要求。由于病毒采样管的制造商是一套完整的离心管，因此可以用于流感病毒，手足口病毒和其他病毒的微生物采样和运输。因此，一次性使用病毒采样管更安全，更方便。毕竟一次性病毒采样管已经经过消毒灭菌，一次性使用非常方便，因此不会有污染的问题。那么一次性病毒采样管在哪里广泛使用？

①、一次性病毒采样管用于疾病控制部和临床部的传染性病原微生物的监测和采样。它适用于流感病毒（普通流感，高致病性禽流感等）的采样操作。手足口病病毒和其他类型的病毒。他也用于支原体和衣原体的采样。

②、还用于将鼻咽拭子样本或特定部位的样本从采样点运送到测试实验室，以进行聚合酶链反应的提取和测试。

③、还用于保存鼻咽拭子样本或特定部位的排列样本，以进行必要的细胞培养。

它不仅被广泛使用，而且具有产品优势的一次性病毒采样管。从外观上看，它简洁干净，适合不同人群。而且这种包装易于打开并且使用非常方便。拭子杆的设计使其易于折断并便于样品运输。最重要的是使用一次性无菌包装，辐射灭菌和独立包装。

我们一直坚持生产高质量的医疗用品，大规模使用一次性病毒采样管可以更好地帮助医务人员收集病毒和监测样本。我们更希望可以为更多的人提供有用的帮助。